不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴

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人乳铁蛋白（LFH）作为母乳中重要的免疫活性成分，是人乳中主要的蛋白质之一，占普通母乳总蛋白含量的10%，是婴儿增强免疫系统能力的重要物质，是婴儿配方奶粉“母乳化”的重要指标。

牛乳铁蛋白（LFB）分子质量与LFH分子质量相近，且牛乳铁蛋白素（LfcinB）与人乳铁蛋白素（LfcinH）的顺序同源性高达69%，LFB原料来源便捷、价廉，尤其是小肽LfcinB的生产更节约成本。如何以低价等效成分替代母乳活性成分，对于降低婴儿配方奶粉中免疫活性物质的成本具有重要的意义。因此，来自东北农业大学食品学院的皮冰冰、赵晓、彭钰凯等人以牛乳清乳铁蛋白（LFW）、牛初乳乳铁蛋白（LFC）与LFH及LfcinB与LfcinH为原料，探究其作用的最佳剂量及相互替代的用量比例关系，为LFB替代LFH在配方奶粉中的添加提供科学理论依据。

1.LF及Lfcin对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

1.1LF对小鼠脾淋巴细胞相对存活率的影响

在24h时，4.00mg/mLLFW及4.00mg/mLLFH与阴性对照组相比显著性差异（P＜0.05）。由细胞相对存活率可知，LFW对淋巴细胞的增殖效果相对高于其他两种LF，其他两种LF对细胞增殖既有促进作用也有抑制作用，但促进效果低于LFW的促进效果。

在48h时，1.00、2.00mg/mL的LFC及1.00、2.00、4.00mg/mL的LFH与阴性对照组相比有显著性差异（P＜0.05）。由细胞相对存活率可知，LF在48h时作用效果随质量浓度增大呈先增强后下降的趋势，LFW的作用效果随时间及质量浓度的变化波动较小。

在72h时，0.50、1.00、4.00mg/mLLFC及1.00、2.00、4.00mg/mLLFH与阴性对照组相比有显著性差异（P＜0.05）。由细胞相对存活率可知，LF在72h时3种LF对细胞的增殖作用效果无明显规律。

在不同时间内不同来源的LF对淋巴细胞的作用程度不同，3种LF在48h的细胞相对存活率较高。LF在48h时作用效果随质量浓度增大整体呈先增强后下降的趋势，LFW的作用效果随时间及质量浓度的变化波动较小。LFH在1.00mg/mL时对淋巴细胞增殖的促进作用效果最高，而LFC在2.00mg/mL时效果与其最为接近。结果表明，LFH的最佳质量浓度为1.00mg/mL，与细胞的添加比例为1∶5，LFC对细胞的增殖作用可替代LFH的作用效果，替代质量浓度约为LFH的2倍。

1.2Lfcin对小鼠脾淋巴细胞相对存活率的影响

在24h时，LfcinB及LfcinH与阴性对照组相比显著性不差异（P＜0.05），但均在μg/mL时细胞相对存活率达到最大。在48h时，75～μg/mLLfcinB及μg/mLLfcinH与阴性对照组相比有显著性差异（P＜0.05）。LfcinH的最佳效果高于LfcinB的最佳效果。在72h时，μg/mLLfcinH与对照组相比有显著性差异（P＜0.05）。由细胞存活率可知，LfcinH的效果整体优于LfcinB的作用效果。

48h的相对存活率显示，LfcinB对淋巴细胞的促进作用在μg/mL时达到最大，而LfcinH在μg/mL时达到最大，且效果优于LfcinB的最大效果。结果表明，LfcinH的最佳添加质量浓度为μg/mL，与细胞的添加比例为1：5，LfcinB对细胞的增殖作用可替代LfcinH的作用效果，替代效果略差。

Lfcin与LF都在最大促进作用效果时LFH的添加用量约为LfcinH的10倍，而LFB的添加量约为LfcinB的16倍，来源于牛乳与人乳的LF及Lfcin均可增强免疫淋巴细胞的存活率，且来源于人的LF及Lfcin对淋巴细胞存活的促进效果高于来源于牛的LF及Lfcin，其中来源于牛乳的LFC作用效果大于LFW，并且使用Lfcin可大大降低使用剂量。

2.LF与Lfcin在ConA刺激下对T脾淋巴细胞增殖的影响

LF与在ConA的刺激下培养细胞48h后，淋巴细胞的相对存活率均先升高后下降。LFW在0.10～4.00mg/mL范围内对ConA刺激的淋巴细胞的增殖能力均为促进作用，在0.50mg/mL达到最大效果，但整体效果差异较小。LFC与LFH在0.10mg/mL时抑制ConA刺激的淋巴细胞增殖，在0.25～4.00mg/mL范围内促进ConA刺激的淋巴细胞增殖，LFC在1.00mg/mL时达到最大效果，LFH在0.50mg/mL时达到最大效果，LFC高于其他两种LF的最佳效果。结果表明，两种LFB可在最大效果0.50mg/mL处替代LFH的作用，且增加LFC的剂量可以达到更佳的效果。

Lfcin在与ConA的刺激下培养细胞48h后，小鼠的免疫淋巴细胞的相对存活率均随着Lfcin质量浓度的增加而先升高后下降。LfcinB在75μg/mL时作用效果达到最高，此质量浓度LfcinH的作用效果与LfcinB的作用效果基本持平，而LfcinH在μg/mL时作用效果达到最高。结果表明，在与ConA共同按1∶1作用淋巴细胞时，LfcinB与LfcinH的最佳添加质量浓度分别为75、μg/mL，按1∶5作用细胞悬液，但加大剂量会加强LfcinH的作用效果，LfcinB对细胞的增殖作用可替代LfcinH的作用效果，替代效果略差。

Lfcin与LF都在最大促进作用效果时LFH的添加用量约为LfcinH的5倍，而LFB的添加量约为LfcinB的13倍。LFH与ConA共同作用的最佳使用质量浓度为0.50mg/mL，此作用效果可用同质量浓度的LFW与LFC替代，且将LFC的剂量提高一倍所得效果远远高于LFH的作用效果。由此表明，来源于牛乳的LF及Lfcin可替代来源于人乳的LF及Lfcin对免疫淋巴细胞存活率的影响作用，并且使用Lfcin可大大降低使用剂量。

3.LF与Lfcin在LPS刺激下对B脾淋巴细胞增殖的影响

LF与LPS对免疫淋巴细胞协同刺激作用后，增强效果随质量浓度的提高先升高后降低，LFH在0.50～4.00mg/mL范围内效果波动不明显，并在2.00mg/mL时达到最大效果。LFW与LFC分别在0.50mg/mL与2.00mg/mL时可近似达到LFH的最大效果。结果表明，在与等量的LPS共同作用下，LFH的最佳添加质量浓度为2.00mg/mL，与细胞的添加比例为1∶5，LFW与LFC质量浓度分别为0.50mg/mL与2.00mg/mL时对细胞的增殖作用可替代LFH的作用效果，替代效果略差。

在分别与LPS按1∶1比例的共同作用下，50～μg/mLLfcinB与LfcinH对淋巴细胞均具有促进增殖的作用，且均呈先升高后下降的趋势。且LfcinH与LfcinB均在μg/mL时对淋巴细胞的增殖促进效果最佳。结果表明，LfcinB可替代LfcinH对免疫淋巴细胞增殖的促进作用，但替代效果略差。

在丝裂原LPS的作用下，Lfcin与LF都在最大促进作用效果时LFH的添加用量约为LfcinH的20倍，而LFW的添加量约为LfcinB的5倍，LFC的添加量约为LfcinB的20倍，且来源于人乳的LF及Lfcin对淋巴细胞存活的促进效果略高于来源于牛乳的LF及Lfcin，由此表明来源于牛乳的LF及Lfcin可替代来源于人乳的LF及Lfcin对免疫淋巴细胞存活率的影响作用，并且使用Lfcin可大大降低使用剂量。

结论

LF与Lfcin均在48h时对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进效果最好，且在一定质量浓度范围内促进效果随质量浓度升高而加强；LF与Lfcin均在一定质量浓度范围内提高刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞的增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞的增殖。结果表明：两种牛乳铁蛋白（bovinelactoferrin，LFB）及LfcinB可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提高婴幼儿免疫能力，LFB推荐添加质量浓度为0.50～2.00mg/mL，Lfcin推荐添加质量浓度为75～μg/mL。

本文《不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较》来源于《食品科学》年39卷13期-页，作者：皮冰冰、赵晓、吕萍萍、彭钰凯、潘琳、许晓曦。DOI:10./spkx2--13027。点击下方阅读原文即可查看文章相关信息。

修改：李莹；实习编辑：陈明茵；责任编辑：张睿梅

图片来源于百度图片

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