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固有淋巴细胞ILC流式染色实例
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ILC细胞简介
固有淋巴细胞(ILCs)是一小群可以分泌细胞因子的淋巴细胞群。根据分泌细胞因子谱的不同可将其分为ILC1，ILC2和ILC3三个亚群。即使在富含ILCs细胞的黏膜组织中，它们也仅仅只占总淋巴细胞数的1%左右，且没有特异性的分子标志。因此，只能用多个细胞表面标志物和分泌的细胞因子谱来定义这群细胞。综上所述，流式细胞术是目前唯一可信的用来分析和纯化ILCs的生物技术[1]。
ILC1s细胞在IL-12的作用下可组成性表达转录因子T-bet，分泌IFN-γ和TNF等细胞因子。ILC1s细胞根据是否表达以及其产生过程中是否需要T-bet、IL-15和IL-7至少可再分为三个亚群。ILC1s细胞在抗胞内病原体感染过程中发挥重要作用[2].
ILC2s细胞在上皮细胞产生的细胞因子IL-25,IL-33和TSLP作用下可分泌大量的2型细胞因子，其在抗蠕虫感染和过敏性炎症的发生过程中都发挥关键作用。然而，不同的组织来源和应用不同的分离方法得到的ILC2s细胞的表型往往不相同[3].
ILC3s细胞在IL-1β、IL-6和IL-23的作用下可组成性表达转录因子RORγt，分泌细胞因子IL-17和/或IL-22。Fetal和adultLTi细胞是ILC3细胞的一个亚群，其表达CCR6和淋巴毒素，但形成过程不依赖于PLZF依赖性的ILCps，并且这群细胞根据CD4、IL-22和IL-17表达不同又可分为不同的亚群。有趣的是，adultILC3s细胞中还有一群CCR6-、T-bet+的细胞，其来源于PLZF依赖性的ILCps，可表达细胞因子IL-22和IFN-γ，并且这群细胞根据NKp46和NKp44表达的不同又可分为不同的亚群。尽管ILC3s表型和产生途径复杂多样，但从总体的功能上来说，ILC3s细胞在抗细胞外细菌和真菌感染、促进组织修复以及免疫调节过程中都发挥重要作用[2].
参考文献：
1.HalimTY,TakeiF()Isolationandcharacterizationofmouseinnatelymphoidcells.CurrProtocImmunol:3.
2.SonnenbergGF,ArtisD()Innatelymphoidcellsintheinitiation,regulationandresolutionofinflammation.NatMed21:-.
3.MoroK,EaleyKN,KabataH,KoyasuS()Isolationandanalysisofgroup2innatelymphoidcellsinmice.NatProtoc10:-.
人的结肠粘膜固有层中ILC1、ILC2和ILC3细胞流式染色实例
图1
Human(colonlaminapropria):ILC1,ILC2和ILC3cells
1.标志物：ILC1:CD45+CD3-CD5-CD14-FceRI-CD11b-CD11c-CD19-CD+c-kit-ST2-cells;ILC2:CD45+CD3-CD5-CD14-FceRI-CD11b-CD11c-CD19-CD+c-kit-ST2+cells;ILC3:CD45+CD3-CD5-CD14-FceRI-CD11b-CD11c-CD19-CD+c-kit+ST2-cells;
2.流式细胞仪：BDBiosciencesLSRII；
3.流式抗体及用量：Cellswerestainedwithantibodiestothefollowingmarkers(allantibodiesfromeBioscienceunlessotherwisestated):anti-CD3(cloneUCHT1),anti-CD5(cloneUCHT2),anti-CD11b(cloneM1/7B),anti-CD11c(clone3.9),anti-CD14(clone61D3),anti-CD19(clone2H7),anti-CD(cloneAD5,Biolegend),anti-FcεRI(cloneAER-37),anti-CD(c-kit)(cloneD2),anti-ST2L(cloneB4E6,MDbioproducts)andanti-CD45(未知);
4.分析软件：FlowJosoftware;
5.圈门策略及染色:(见图1)ILCswereidentifiedasCD45+andlineage(xaxis:CD3,CD5,CD14,andFceRI;yaxis:CD11b,CD11c,andCD19)negative,CD+,andfurtherdividedbyexpressionofST2L(ILC2s,red)andc-kit(ILC3s,blue)oraslackingexpressionofbothmarkers(ILC1s,black);
6.此例染色结果暂时还没有经过本北京治疗白癜风哪里好北京治疗白癜风大约花多少钱啊
